Ezrin在UMR106骨肉瘤细胞株移植瘤成瘤及肺转移中的作用

目的探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对骨肉瘤细胞株UMR106成瘤及转移能力的影响。方法为获得较好的干扰效果，针对大鼠Villin2基因（Ezrin编码基因）设计2个发夹式RNA（shRNA）。合成后克隆入载体pGenSil-1，扩增并中量提取质粒，应用脂质体LipofectamineTM2000转染进UMR106细胞。采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western印迹检测Ezrin的表达。选取效果最好的shRNA转染UMR106细胞并行G418筛选，传代扩增。扩增后细胞原位接种到SD大鼠胫骨结节，并设立正常细胞组和阴性对照组，观察记录肿瘤形成和大鼠存活时间，计数肺表面转移灶数目，镜检定位增强型绿色荧光蛋白（enhancedgreenfluorescenceprotein,EGFP）在原发灶和肺转移灶内的表达。结果①shRNA1干扰作用最明显，下调达90%。②移植时稳定转染细胞数约50%。③实验组与对照组均100%成瘤，成瘤时间正常细胞组为(10.25±1.07)d，阴性对照组为(10.08±0.88)d，实验组为(10.30±1.08)d，三者间没有明显差别（P>0.05）；实验组存活时间（42.30±17.25）d明显长于正常细胞组（20.60±11.70）d（P<0.01）和阴性对照组（22.40±7.42）d（P<0.01）；实验组肺转移灶数目明显低于正常细胞组（P<0.01）和阴性对照组（P<0.01），分别为(39.40±51.86)个、(124？60±39.78)个和(117.60±36.48)个；阴性对照组中原发灶和肺转移灶内均有EGFP表达，而实验组肺转移灶内未见EGFP表达。结论Ezrin蛋白是骨肉瘤肺转移中的一个关键因子，干扰Ezrin蛋白表达能抑制其肺转移的发生，可以作为预防肺转移的靶点。