超声微泡促腺病毒载体转染MDR1基因效率的体外实验研究

目的探讨超声微泡造影剂在体外促进腺病毒载体介导的MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的效率，并初步探讨其安全性。方法根据是否加入超声微泡造影剂和超声辐照将分选的兔骨髓单个核细胞分为常规培养组(A)、腺病毒MDR1基因转染组(B)、腺病毒MDR1基因转染＋超声辐照组(C)、微泡造影剂+腺病毒MDR1基因转染组(D)、微泡造影剂+腺病毒MDR1基因转染＋超声辐照组(E)。收集各组细胞，应用RT-PCR法、流式细胞技术等分别从基因、功能及细胞生物学特性等方面检测外源性MDR1基因在骨髓单个核细胞内的功能性表达及安全性。结果收获高滴度的Ad5-MDR1腺病毒载体并成功制备腺病毒微泡造影剂；RT-PCR结果显示，除A组外其余4组在194bp处均观察到特异性MDR1电泳条带，证实外源性MDR1基因通过腺病毒载体整合到细胞基因组中，且E组MDR1电泳条带的光密度比值明显高于B、C、D组（P<0.05）；柔红霉素排出实验证实外源性MDR1基因表达产物P-gp有药物外排泵功能，且E组P-gp阳性率最高（P<0.05），而柔红霉素阳性率显著降低；一定强度的超声辐照及微泡造影剂对骨髓单个核细胞的细胞周期无明显影响。结论低频超声波击碎微泡造影剂，能促进以腺病毒为载体介导的外源性MDR1基因转染兔骨髓单个核细胞的效率，且安全可行。