miR-222在胃癌中的表达分析及其靶基因FOS的鉴定

目的分析miR-222在胃癌中的表达水平并鉴定miR-222的靶基因。方法选取第三军医大学新桥医院普外科10例患者的胃癌及远癌组织，匀浆法提取总RNA，用Real-timePCR法检测miR-222表达。利用miRNA靶基因预测数据库TargetScan，MICROCOSM及PicTar对miR-222的靶基因进行预测。化学合成包含有miR-222结合位点的靶基因3′非编码区（3′UTR）退火引物，插入荧光素酶报告载体pMIR-REPORT及绿色荧光蛋白（GFP）报告载体pMIR-GFP-REPORT，检测荧光素酶的活性变化及观察GFP表达量，并在蛋白水平用Westernblot检测miR-222对靶基因的抑制。结？果miR-222在70%（7/10）的胃癌组织样本中表达上调。生物信息学（TargetScan，MICROCOSM及PicTar3个miRNA靶基因预测数据库）分析可得在包括人类在内的不同物种中，FOS基因3′UTR区都有miR-222的保守结合种子序列。通过荧光素酶活性检测和GFP抑制试验可得miR-222在mRNA水平可以与FOS基因结合。Westernblot结果显示miR-222可以抑制c-fos蛋白表达。结论miR-222在胃癌样本中表达上调，证明FOS为miR-222的一个靶基因。