下调DC-SIGN-ManLAM结合信号恢复树突状细胞活化初始T细胞的能力

目的探讨利用RNAi下调DC-SIGN与ManLAM结合信号对树突状细胞(dendriticcells,DCs)活化初始T细胞能力的影响。方法利用筛选出的人DC-SIGN分子RNAi有效靶点，构建并包装产生慢病毒表达载体。实验分为：干扰组、空载体组和空白对照组。利用慢病毒表达载体下调DCs表面DC-SIGN分子水平，流式细胞仪、RT-PCR及Westernblot检测各组DCsDC-SIGN分子水平变化，在LPS存在下，与ManLAM共培养18h后，流式细胞仪检测DCs表面成熟标志物，ELISA方法检测DCs刺激CD4+CD45RA+初始T细胞向Th1分化能力，以了解下调DC-SIGN与ManLAM结合信号对DCs活化初始T细胞的能力的影响。结果①包装慢病毒产生浓缩病毒悬液的滴度为1×109TU/ml。②流式细胞仪检测干扰组DCs表面DC-SIGN分子表达水平较其余2组显著降低（F=14.19,P<0.05），RT-PCR检测干扰组DC-SIGN目的条带灰度值/内参灰度值(0.2525±0.1396)与空白对照组(0.5722±0.1909)及空载体组(0.5487±0.1193)相比灰度值显著下降(F=8.142,P<0.05)，Westernblot检测干扰组DCs内DC-SIGN蛋白水平均显著低于空载体组和空白对照组(F=51.376,P<0.05)。③干扰组DCs的成熟标志物CD86（F=15.59,P=0.004）、CD83（F=18.03，P=0.003）、HLA-DR（F=7.684,P=0.022）水平较空载体组和空白对照组明显增高。④DCs与初始T细胞共培养，干扰组分泌IFN-γ（F=18.434,P=0.003）、IL-2（F=31.08,P=0.001）水平较空载体组和空白对照组显著增高。结论利用RNAi慢病毒载体下调DCs表面DC-SIGN水平，减弱DC-SIGN与ManLAM结合信号，能够恢复DCs的成熟受阻，最终使得DCs活化初始T细胞的能力恢复。