幽门螺杆菌UreB414-OMP18-LTB融合蛋白的构建及免疫原性初步研究

目的构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)尿素酶B亚单位活性片段（UreB414）、外膜蛋白（OMP18）及大肠埃希菌LTB融合疫苗并研究其抗原性。方法PCR扩增ureb414、omp18、ltb基因，分别克隆入pMD18-T载体，测序并鉴定方向后依次连接，构建融合基因UOL，然后将其亚克隆入原核表达载体pET-28a，转化入大肠埃希菌BL21，SDS-PAGE电泳进行表达，Western印迹检测表达蛋白的抗原性。结果PCR扩增分别获得约414、537bp和320bp产物，与GenBank中相关序列具有高度同源性，三者融合后获得一约1200bp目的基因。重组融合蛋白表达量可达细菌总蛋白的15％，免疫印迹检测结果显示该重组蛋白可为UreB、OMP18、LTB兔抗血清特异识别，具有良好的抗原性。结论成功构建了具有良好免疫原性的UreB-OMP18-LTB融合蛋白。