重组人β防御素4的原核表达、纯化及抗铜绿假单胞菌活性初探

目的制备原核表达的重组人β防御素4（humanbetadefensin4，HBD4），初步探讨其对铜绿假单胞菌的体外抗菌活性。方法将编码HBD4的DNA片段连接到大肠杆菌表达载体pET42a中，构建好的表达质粒pET42a-HBD4转化到表达菌株BL21(DE3)中，0.5mmol/LIPTG诱导表达4h，亲和纯化融合蛋白后经Westernblot鉴定，再以肠激酶酶切融合蛋白，镍柱亲和层析分离HBD4；采用打孔法初测其抗铜绿假单胞菌活性，并用微量稀释法测定HBD4与3种抗生素的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC），比较其抗铜绿假单胞菌活性差异。结果GST-HBD4在大肠杆菌中以可溶形式成功表达，纯化的重组HBD4体外对铜绿假单胞菌有抗菌活性，其效能略低于亚胺培南，而高于哌拉西林和环丙沙星。结论采用基因工程技术成功表达了重组HBD4，其对铜绿假单胞菌有较强的杀菌活性，具有烧伤创面感染治疗的应用前景。