肝内胆管上皮细胞上皮-间叶转化的实验研究

目的观察人肝内胆管上皮细胞（humanintrahepaticbiliaryepithelialcells，HIBEpiC）上皮-间叶转化（epithelial-mesenchymaltransitions,EMT）现象，探讨EMT在胆管周围纤维化中的作用及其可能的分子机制。方法HIBEpiC用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）处理48、72h后，用PCR及Westernblot技术检测E-cadherin、S100A4和α-SMA的表达，以及与EMT信号通路相关的TGF-β1的表达；同时用紫杉醇、siRNAsmad2/3阻断TGF-β1的作用，探讨TGF-β1/smad2/3信号通路在HIBEpiC发生EMT时的可能作用。结果HIBEpiC经LPS处理后，TGF-β1mRNA表达于48h达到高峰，72h后开始下降，但维持较高水平（P<0.01，P<0.05）；EMT标志物E-cadherinmRNA和蛋白表达随培养时间的延长逐渐降低（P<0.01），而S100A4、α-SMAmRNA及蛋白表达明显上调（P<0.01，P<0.05）。紫杉醇可使HIBEpiC中LPS所诱导的TGF-β1、Smad2/Smad3mRNA表达明显下降，特别是在48h最明显（P<0.01）。用siRNA技术可使Smad2/3mRNA及蛋白表达明显下调（P<0.01），同时可使与HIBEpiC共培养EMT标志物E-cadherinmRNA及蛋白质表达上调（P<0.01，P<0.05），S100A4和α-SMA表达明显下调（P<0.01）。结论LPS可诱导HIBEpiC中TGF-β1的表达，使胆管上皮细胞发生EMT，抑制TGF-β1或Smad2/3，可使EMT发生逆转，提示TGF-β1或Smad2/3可能成为预防胆道周围纤维化的一个潜在靶点。