三丁基过氧化氢通过调控细胞周期诱导Sca-1+造血干/祖细胞衰老

目的探讨三丁基过氧化氢（t-BHP）诱导Sca-1+造血干/祖细胞（HSC/HPC）衰老的细胞周期调控机制。方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC后分为对照组（常规培养细胞），衰老模型组（用t-BHP复制细胞体外衰老模型）。通过衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落（CFU-Mix）培养观察t-BHP诱导Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学作用；RT-PCR检测衰老相关基因p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA的表达。Westernblot检测细胞周期调控蛋白P16INK4a、P21Cip1/Waf1、CyclinD1、CyclinE、CDK4、CDK2的表达。结果免疫磁性分选法分离纯化的Sca-1+HSC/HPC纯度可达（87.33±1.25）%。衰老组细胞SA-β-Gal染色阳性率为（57.9±4.2）%，高于对照组[（9.1±2.4）%，P<0.05]，G0/G1期细胞比例为（87.53±4.03）%，高于对照组[（72.26±3.40）%，P<0.05]，生成造血祖细胞混合集落（CFU-Mix）数为（1.5±1.2）/104，低于对照组[（9.8±2.1）/104，P<0.05]。与对照组比较，衰老组细胞p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1mRNA及P16INK4a、P21Cip1/Waf1、CyclinD1蛋白表达上调（P<0.05），CyclinE、CDK4、CDK2蛋白表达下调（P<0.05）。结论t-BHP能有效诱导Sca-1+HSC/HPC衰老，其机制可能与调控细胞周期调控分子的表达有关。