PI3K/Akt通路在硫化氢后处理保护心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的探讨硫化氢后处理对原代培养的新生大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用及可能机制。方法以硫氢化钠(NaHS)作为外源性硫化氢供体。原代培养新生大鼠的心肌细胞随机分为5组：①正常对照组；②缺氧复氧组(hypoxia-reoxygenation，HR组)；③二甲基亚砜组(dimethylsulfoxide，DMSO组)；④硫化氢后处理组(hydrogensulfidepost-conditioning，H2S组)；⑤LY294002+H2S后处理组(LY+H2S组)。分别于缺氧前和复氧2h检测各组的心肌细胞存活率、培养液中CK和LDH的活性；复氧末，用流式细胞学技术检测各组心肌细胞凋亡情况；Westernblot检测HIF-1α、p-Akt与Akt蛋白的表达情况。结果通过比较可知，复氧2h时，H2S组心肌细胞存活率较HR组升高显著[(71.55±1.46)%vs(62.03±1.29)%，P<0.01]，CK、LDH活性以及心肌细胞凋亡率明显降低[(244.99±21.38)U/Lvs(329.53±26.14)U/L，(371.64±18.62)U/Lvs(427.69±13.25)U/L，(10.37±1.51)%vs(17.38±2.04)%，P<0.01]；同时，HIF-1α和p-Akt蛋白表达水平明显升高[(63.93±4.64)%vs(41.82±6.14)%，(62.59±2.11)%vs(41.04±4.01)%，P<0.01]。然而，在H？2S后处理同时加入PI3K/Akt信号通路特异性抑制剂LY294002后，与H2S组相比，LY+H2S组心肌细胞存活率降低明显(63.65±2.01)%，CK、LDH活性以及心肌细胞凋亡率升高显著[(307.80±21.68)U/L，(421.51±15.95)U/L，(15.17±1.56)%，P<0.01]；HIF-1α和p-Akt蛋白表达水平亦降低明显[(51.79±4.27)%，(47.42±3.15)%，P<0.05和P<0.01]。结论H2S后处理可通过PI3K/Akt信号通路促进HIF-1α表达，从而拮抗心肌细胞的缺氧复氧损伤。