β防御素2在恶性黑色素瘤B16细胞中的稳定表达及其生物学效应研究

目的建立稳定表达防御素mBD2的恶性黑色素瘤细胞B16-mBD2，研究mBD2对B16细胞生物学特性的影响。方法在前期构建好mBD2真核表达质粒的基础上，脂质体法转染恶性黑色素瘤B16细胞，G418筛选得到稳定表达细胞株B16-mBD2，RT-PCR和Westernblot从mRNA和蛋白角度鉴定mBD2分子的表达；MTT法鉴定其生长曲线；流式细胞仪分析细胞周期分布、凋亡情况及细胞膜表面分子CD80、CD86、MHCⅠ(H-2Kd)、MHCⅡ(I-Ad)的表达。结果成功构建稳定表达mBD2的B16细胞，RT-PCR和Westernblot分别从mRNA及蛋白水平验证了mBD2分子表达；稳定表达mBD2的细胞B16-mBD2与转染空载体的B16-p细胞及野生型B16细胞相比，细胞增殖明显减慢，从48h开始，各时间点细胞活力显著降低（P<0.05）；B16-mBD2细胞处于S期的比例（36.03±0.97）%显著增高（P<0.05）；凋亡率及细胞膜表面分子CD80、CD86、MHCⅠ(H-2Kd)、MHCⅡ(I-Ad)表达无明显差异（P>0.05）。结论mBD2明显抑制恶性黑色素瘤B16细胞的增殖，其机制可能与诱导细胞周期S期阻滞有关；mBD2对细胞凋亡率及细胞膜表面免疫分子的表达无影响。