特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法的建立和优化

目的以16SrRNA编码序列为靶基因，建立特异引物PCR鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌方法并优化。方法以类鼻疽伯克霍尔德菌标准菌株K96243的16SrRNA编码序列为靶序列，通过PrimerPremier5软件搜索特异的引物，以该菌为模板，优化特异引物PCR的退火温度、退火时间和反应循环数等条件。得到最优PCR反应条件后，将该方法用于检测临床分离的类鼻疽伯克霍尔德菌菌株和常见细菌感染病原体（大肠杆菌、痢疾志贺菌、伤寒沙门菌、幽门螺旋杆菌、金黄色葡萄球菌、甲型链球菌和乙型链球菌），评价该方法的有效性和特异性。结果共设计3对引物，分别扩增16SrRNA编码序列283~672、760~1061、771~1193片段，优化后PCR反应条件为：94℃预变性4min，94℃变性40s，54.5℃退火20s，72℃延伸40s，24个循环，最后延伸1min；特异性分析发现此方法能将类鼻疽伯克霍尔德菌与其他常见感染病原菌进行有效地鉴别诊断。结论成功建立并优化一种快速鉴定类鼻疽伯克霍尔德菌的方法，通过此方法能有效的从单个菌落中和基因组水平鉴定临床分离的8株类鼻疽伯克霍尔德菌。