血小板衍生生长因子D对体外破骨细胞分化过程的影响

目的用外源性血小板衍生生长因子D（platelet-derivedgrowthfactorD,PDGF-D）体外刺激外周血单核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)，观察其对破骨细胞（osteoclasts，OCs）分化过程的影响。方法采集外周血并分离单个核细胞，实验分为3组：阳性对照组为NF-κB配体激活因子（receptororactivatorofNF-κBLigand,RANKL）和巨噬细胞集落刺激因子（macrophagecolonystimulatingfactor,M-CSF）联合诱导，阴性对照组（细胞培养基）和实验组（PDGF-D）。应用抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrateresistantacidphosphatase,TRAP）染色观察各组破骨细胞前体细胞向破骨样细胞（osteoclastlikecells，OLCs）的分化情况，Real-timePCR检测破骨细胞标志基因TRAP、CathepsinK、MMP-9mRNA的表达情况，Westernblot检测各组细胞中CathepsinK蛋白的表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组细胞上清液中MMP-9的表达。结果①TRAP染色可见阳性对照组和实验组的OLCs显著多于阴性对照组。②阳性对照组和实验组TRAP、CathepsinK、MMP-9mRNA的相对表达量均显著高于阴性对照组（P<0.05），但阳性对照组和实验组间无统计学差异（P>0.05）。③阳性对照组和实验组MMP-9（ELISA检测）、CathepsinK蛋白（Westernblot检测）表达均显著高于阴性对照组（P<0.05），但阳性对照组和实验组间无统计学差异（P>0.05）。结论外源性PDGF-D可在无RANKL/M-CSF的条件下于体外独立诱导破骨前体细胞向OLCs分化。