小鼠Bicc1基因RNAi序列的筛选与鉴定

通过网上提供的生物信息学分析软件进行搜索和比对，初步筛选到3个较好的针对小鼠双尾-C（Bicc1）基因的RNA干扰（RNAi）序列。合成这三个干涉序列片段后克隆到pRS-HushshRNA载体中。构建Bicc1基因的真核表达载体pEGFP-C3-Bicc1，将绿色荧光蛋白(GFP)标签标记在Bicc1蛋白上。利用细胞转染技术将pEGFP-C3-Bicc1与3个干涉序列载体共转染至体外培养的HEK-293细胞中，最后通过细胞荧光强度，半定量PCR和Westernblotting鉴定出其中两个序列（pRS-Hush-RNAi-Bicc1-N/-C）能明显降低Bicc1蛋白在HEK-293细胞中的表达水平，为下一步建立起低表达Bicc1的稳定细胞株和研究小鼠Bicc1的功能提供了良好的材料。