PCR/SSCP在恙虫病东方体基因分型中的应用

？目的采用优化聚合酶链反应/单链构象多态性分析(PCR/SSCP)方法分析恙虫病东方体(Orientiatsutsugamushi,Ot)基因型的各项条件。方法对恙虫病东方体山东分离株、小盾纤恙螨匀浆及恙虫病人全血中提取的Ot-Sta56基因进行分析。采用PCR/SSCP检测,并与NestedPCR基因分型的结果进行比较。结果山东地区35份标本提取的Ot-DNA群引物扩增产物呈现出2种不同的单链构象图谱,其中33份与国际参考株Gilliam,Karp,Kato均不相同,应属这3型以外的一种基因型,经NestedPCR分型证实为Kawasaki型;2份与Karp株相同。表明山东地区恙虫病东方体至少存在2种型别。检测结果与Nested-PCR基因分型结果相符。条件优化以8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,常温下,200V电泳3h获得的电泳结果较为理想,并易于操作。结论PCR/SSCP条件优化后可用于快速分析恙虫病东方体基因型,且操作简便,结果准确。