改良彗星试验检测紫外线照射致淋巴细胞DNA损伤

？目的用不同方法提取外周血淋巴细胞进行彗星实验,以确认最佳实验条件.通过紫外线照射全血比较不同铺胶层数对淋巴细胞DNA损伤的影响.方法将铺有细胞、凝胶混合物的玻片在pHl0的碱性裂解液中作用1h,碱性电泳液中预电泳20min,25V300mA电泳20min,15min中和2次,5μg/mlPI染色15min,计算彗星细胞率.并用本实验室方法观察紫外线照射对全血淋巴细胞的DNA损伤.结果用生理盐水、PBS作为缓冲液在冰浴下提取淋巴细胞的彗星细胞率与全血结果相近.但室温下提取淋巴细胞DNA损伤明显增加.30W紫外灯照射30min、45min与未照射组相比彗星细胞率明显增加,差异有显着性意义(P<0.05),一层胶与二层胶结果相比差异无显着性意义(P>0.05).结论全血用于检测淋巴细胞DNA损伤操作简便,结果可靠,无人为操作引起的DNA损伤,紫外线可诱导全血淋巴细胞DNA链断裂,有明显的剂量-效应趋势,减少铺胶层数,节省时间,结果与二层胶彗星细胞率无差异.