幽门螺杆菌HspA乳酸菌疫苗构建及免疫反应性鉴定

？目的探讨幽门螺杆菌(Hp)热休克蛋白A(HspA)在食品级乳酸乳球菌NZ3900菌株中的克隆表达及免疫反应性。方法利用基因重组技术构建乳酸乳球菌重组子NZ3900/pNZ8110-hspA;绘制生长曲线,观察hspA插入对乳酸乳球菌重组子生长影响及乳酸链球菌素(Nisin)对重组子生长影响;采用钠十二烷基硫酸盐-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测HspA在乳酸乳球菌中的表达;应用western-blot鉴定重组子表达HspA的免疫反应性。结果成功扩增出幽门螺杆菌河南分离株(MEL-Hp27)的hspA基因,构建了hspA基因的乳酸乳球菌原核表达系统(NICE);细菌生长曲线显示hspA的插入未对乳酸乳球菌重组子的生长产生影响,除10ng/mLNisin对重组子生长影响较小外,20~100ng/mLnisin对重组子的生长均有明显抑制;SDS-PAGE和TricineSDS-PAGE检测均未观察到HspA条带;western-blot鉴定结果显示乳酸乳球菌表达的HspA抗原蛋白具有良好免疫反应性。结论HspA在乳酸乳球菌中的少量表达影响重组菌生长。