山药ans基因的克隆和分子特性及其与花青素积累的关系

为了阐明花青素合成酶(ans;ec1114111119)基因在山药地下块茎花青素积累过程中的功能,利用rt-pcr和race技术从田薯(dioscoreaalatal.)地下块茎中分离到一个ans基因(daans1),并运用相关软件、norhtern杂交和原核表达等技术分析了该基因;同时测定了ans酶活性和花青素含量。结果显示,该基因序列大小为1387bp,最大开放阅读框(orf)、5′端和3′端的非翻译区分别由1077bp、9bp和301bp组成,且有真核生物基因5′-和3′-末端序列的典型特征,是一个完整的全长cdna序列;daans1最大orf可编码358个氨基酸,其分子量和等电点分别为40.4kd和5.26,并含有依赖于2-酮戊二酸和fe2+氧化的保守结构域,其中包括与2-酮戊二酸特异结合的精氨酸2个(arg295、304)及与fe2+结合的保守组氨酸5个(his238、243、249、276、294)和天冬氨酸3个(asp240、260、279);daans1与所选被子植物ans基因的同源性均远高于与裸子植物的同源性,而且与被子植物中双子叶旋花科植物ans基因的亲缘关系最近,但仅能将属、种间植物合理分类;daans1表达丰度从初前期增至最强的盛前期后一直降至最低的后中期,到收获时又稍增强,其表达模式与ans酶活性和花青素含量的变化具协同性。这些结果表明,daans1为植物ans基因的一员,可评价属、种间植物的亲缘关系,在转录水平上受到调控而影响田薯地下块茎花青素形成。