三角褐指藻磷酸甘油酸变位酶基因可能侧翼序列的筛选、克隆以及序列测定

采用RT-PCR 的方法从酵母中成功地得到了磷酸甘油酸变位酶的cDNA 基因, 分别用32P 和地高辛-ddUTP 标记以用作探针。以32P 标记的探针筛选三角褐指藻基因组文库, 获得了4kb 的阳性DNA 片段; 进一步分析发现, 该4kb 片段的真正阳性区域是位于片段端部的306bp 的序列, 因此认为该序列为三角褐指藻磷酸甘油酸变位酶基因的侧翼部分。克隆该306bp 的DNA 片段, 并且测定其序列。结果表明, 该306bp 的DNA 片段包含两个同向重复序列, 每个重复序列的大小为116bp, 在每个重复序列中均含有GGTTCAATGT 区域, 这与一般常见的真核基因5ˊ端的CAAT box 有相似之处。