PCR检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)中假阴性的探讨

采用PCR、核酸探针斑点杂交、组织切片等方法研究了PCR检测白斑综合征病毒(WSSV)中的假阴性问题。设计了一对引物用于PCR检测WSSV，PCR扩增的产物长度为235bp，检出极限为0.1pg WSSV DNA。结果表明，PCR检测15例攻毒螯虾鳃样品时出现一例阴性，而经10-106倍稀释后的样品却呈现阳性，推断PCR出现了假阴性。核酸探针斑点杂交及组织切片结果表明注射WSSV的螯虾鳃组织确已被严重感染，进一步证实了PCR假阴性。根据PCR的检出极限及模板稀释梯度，推算出该PCR能成功扩增的引物与模板浓度的比例范围约为2.4×105-2.4×1010。