酵母双杂交技术构建重组维甲酸X受体(RXR)基因酵母

应用酵母双杂交技术构建重组维甲酸X受体(RXR)基因酵母,用以筛选具有类/抗维甲酸活性的化合物.构建含有RXR基因的酵母表达质粒pGBT9-RXRβ,称为诱饵质粒;构建含有RXR协同激活因子GRIP1基因的酵母表达质粒,形成靶质粒pGAD424-GRIP1;诱饵质粒和靶质粒同时转染酵母细胞Y187,于营养缺陷型培养基(SD/-Trp/-Leu)上筛选阳性菌落,构建RXR-GRIP1双杂交酵母.考察RXRβ-GRIP1酵母与典型的RXR配体化合物天然激素-9-顺维甲酸的结合情况.结果表明,9-顺维甲酸能够诱导RXRβ-GRIP1酵母酶活性,并存在显著的剂量-效应关系,EC50值为1.5×10-7mol·L-1.构建的RXRβ-GRIP1酵母与报道的RXRβ-TIF2酵母相比,对9-顺维甲酸的EC50值接近,但诱导活性较高.进一步建立了检测环境污染物诱导/抑制RXRβ-GRIP1酵母β-半乳糖苷酶活性的实验方法,用于检测三丁基锡乙酸盐化合物、Aroclor1254以及水厂进水和出水样品.证明三丁基锡乙酸盐能够较强地诱导RXRβ-GRIP1酵母酶活性;而Aroclor1254能够显著抑制9-顺维甲酸诱导的RXR酶活性,是RXR拮抗剂;水厂进水样品能够抑制9-顺维甲酸诱导的酶活性,而现行工艺对RXR拮抗剂有很好的去除效果.证实了该重组基因酵母用于环境污染物类/抗维甲酸干扰效应的筛选可行性.