褐飞虱细胞色素P450基因CYP4C62的原核表达及多克隆抗体的制备

【目的】细胞色素P450单加氧酶在昆虫生长发育和适应环境过程中发挥着重要功能。【方法】本研究克隆了褐飞虱Nilaparvatalugens细胞色素P450基因CYP4C62的开放阅读框（不含信号肽编码序列部分），在大肠杆菌Escherichiacoli中实现了高效表达，经Ni-NTA琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化得到了重组的CYP4C62蛋白。将该蛋白免疫日本大耳白兔Oryctolaguscuniculus雄兔，制备了兔抗CYP4C62血清抗体。采用间接ELISA方法检测了血清抗体的效价；并通过Western印迹杂交检测了该抗体的免疫学特异性。【结果】结果表明，通过大肠杆菌表达出的CYP4C62蛋白相对分子量为56kD。间接ELISA法检测表明，制备的兔抗CYP4C62抗体的效价达到1∶100000。Western印迹杂交证实，该抗体既可与异源表达的CYP4C62蛋白特异性结合，也可以与褐飞虱总蛋白中内源的CYP4C62特异性结合，表明具有较好的免疫反应特异性。【结论】CYP4C62多克隆抗体的成功制备，为后续分析CYP4C62在褐飞虱各组织中的时空表达水平，并通过免疫组织化学法定位分析该蛋白的组织、细胞及亚细胞分布规律，及最终解析CYP4C62的生物学功能奠定了基础。