褐飞虱热胁迫下内参基因的筛选及热激蛋白基因表达分析(英文)

【目的】褐飞虱Nilaparvatalugens(St？l)是为害水稻的重要害虫之一，温度是影响其暴发、迁飞的主要环境因子之一。本研究旨在探讨研究褐飞虱对高温胁迫适应性的热激蛋白基因表达调控模式。【方法】分别以不同的高温(30℃~40℃)处理褐飞虱雌、雄虫1h和2h，利用荧光定量PCR技术检测其体内的β-actin1,β-actin2,β-actin3,28SrRNA,18SrRNA和α-2-tubulin6个内参基因的表达量，用geNorm和BestKeeper软件分析确定最稳定表达的内参基因，并检测热胁迫后hsp70和hsp90基因在处理褐飞虱成虫体内的表达模式。【结果】geNorm软件分析结果表明，热胁迫后褐飞虱内参基因稳定性在雌虫体内为：β-actin1=β-actin3>28SrRNA>α-2-tubulin>18SrRNA>β-actin2；在雄虫体内为：β-actin1=β-actin3>α-2-tubulin>28SrRNA>18SrRNA>β-actin2。BestKeeper软件分析结果显示，在热胁迫的雌、雄虫体内β-actin1均最稳定，18SrRNA次之，β-actin2最不稳定。两种软件分析结果基本一致。以β-actin1为校正内参基因，荧光定量PCR分析hsp70和hsp90在不同热胁迫条件下的表达模式，结果表明，各高温处理下hsp70表达量与对照26℃下的表达量没有显著性差异；而hsp90基因表达模式表现为被高温诱导上调表达，在雌、雄虫体内表达量达到最高的处理条件分别为40℃和38℃处理2h。【结论】β-actin1基因可以作为热胁迫下褐飞虱雌雄虫体内基因表达模式分析的校正内参基因使用。褐飞虱hsp90基因能被高温诱导表达，该基因可能在褐飞虱适应热胁迫过程中起着重要的作用