核桃举肢蛾性信息素结合蛋白2的分子克隆和免疫荧光定位

【目的】明确核桃举肢蛾AtrijuglanshetaoheiYang性信息素结合蛋白2(AhetPBP2)在核桃举肢蛾触角中的分布。【方法】本研究提取羽化后3-4d的核桃举肢蛾成虫触角总RNA并反转录合成cDNA，设计简并引物进行RT-PCR获得cDNA片段，然后利用RACE技术获得AhetPBP2全长cDNA序列。将去除信号肽序列的AhetPBP2进行原核表达，重组蛋白经镍柱纯化并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。制备的多克隆抗体作为一抗对核桃举肢蛾触角进行免疫组化分析。【结果】AhetPBP2基因cDNA序列全长923bp，开放阅读框504bp，共编码167个氨基酸，分子量为19.26kD，等电点为5.47。1mmol/LIPTG诱导10h获得可溶性重组蛋白，Westernblot结果表明重组蛋白诱导表达成功，ELISA检测显示抗体效价为1:1024000。免疫荧光定位结果显示核桃举肢蛾成虫触角部分感器被AhetPBP2抗体标记。【结论】核桃举肢蛾成虫触角的部分感器中可能存在AhetPBP2，推测该部分感器具有感受性信息素的功能。