基于EB1基因的环介导等温扩增（LAMP）法检测感染家蚕微粒子病的蚕卵

【目的】家蚕Bombyxmori微粒子病一直影响着蚕种业的健康发展，快速而准确地检测出寄生于蚕卵中的家蚕微孢子虫Nosemabombycis对于有效控制家蚕微粒子病危害意义重大。【方法】环介导等温扩增（loop-mediatedisothermalamplification,LAMP）法是一种快速、灵敏、特异的DNA体外恒温扩增方法，本文基于LAMP检测法的原理，依据家蚕微孢子虫孢子繁殖复制相关的EB1基因（GenBank登录号：KF421134.1）设计LAMP引物，对LAMP反应体系的最佳反应温度、内外引物浓度比、检测反应的特异性、灵敏度等进行研究，建立了一种检测蚕卵感染家蚕微粒子病的LAMP检测方法。【结果】结果表明，基于EB1基因建立的LAMP检测方法在63℃恒温下在1.5h内就可完成对样品的有效检测，本LAMP法对家蚕微孢子虫孢子DNA的检测灵敏度为5.0×10-3ng/μL，对EB1-pMDTM19-T质粒标准品的检测灵敏度为1.0×102copies/μL，同时对人工感染家蚕微粒子病单个母蛾产下蚕卵的1/8卵圈量或1粒蚕卵均能检出阳性结果。上述结果都分别应用凝胶电泳法、恒温荧光检测仪以及SYBRGreenⅠ显色肉眼观察法得到同步判定。【结论】本研究建立的基于EB1基因LAMP法可用于蚕卵微粒子病的检测，LAMP法为蚕种质量检验及成品卵微粒子病现场检疫提供了新技术。