四个达摩凤蝶新孵幼虫细胞系的建立及其生物学特性

【目的】建立达摩凤蝶PapiliodemoleusLinnaeus新孵幼虫细胞系，并对其生物学特性进行研究。【方法】使用改良配方的Grace培养基并辅以20%胎牛血清，通过原代和传代培养建立达摩凤蝶新孵幼虫细胞系。通过显微观察、细胞活力分析、核型分析和分子鉴定，获得4个新建细胞系的生物学特性数据。使用Bac-To-Bac杆状病毒表达系统构建重组分泌型碱性磷酸酶杆状病毒(AcMNPV-SEAP)。使用有限稀释法测定达摩凤蝶细胞系对AcMNPV-SEAP的半数组织培养感染剂量(TCID50),比较达摩凤蝶细胞系对AcMNPV-SEAP的敏感性。【结果】建立了4个贴壁生长的达摩凤蝶新孵幼虫细胞系(RIRI-PaDe-1,RIRI-PaDe-2,RIRI-PaDe-3及RIRI-PaDe-4)，且均传至60代以上。形态学方面，细胞系RIRI-PaDe-1和RIRI-PaDe-4较为相近，均由圆形、梭形以及多边形细胞组成，细胞系RIRI-PaDe-2主要为圆形细胞，而RIRI-PaDe-3主要为类似表皮细胞和纤维状细胞。细胞增殖动力学方面，4个细胞系的群体倍增时间分别为69.77,67.42,81.48及65.43h。核型分析显示4个细胞系染色体数量均呈正态分布，其中RIRI-PaDe-2,RIRI-PaDe-3以及RIRI-PaDe-4的染色体数目分布区间比较接近，在45~97条之间，RIRI-PaDe-1的染色体条数相比偏少，在36~90条之间。通过比对4个达摩凤蝶细胞系和虫卵的细胞色素c氧化酶亚基I(COI)基因序列，证明4个新建细胞系来源于达摩凤蝶组织。比较4个细胞系对AcMNPV-SEAP敏感性发现RIRI-PaDe-3对此病毒较为敏感，可作为重组杆状病毒表达的宿主。【结论】虽然4个新建达摩凤蝶细胞系的来源相同，具有相同的遗传背景，但其生物学特征仍有明显差异，具有进一步研究的价值。