嗜热子囊菌原变种Thermoascusaurantiacusvar.aurantiacus热稳定几丁质酶的克隆表达及活性研究

研究通过RT-PCR和Tail-PCR技术从嗜热子囊菌原变种Thermoascusaurantiacusvar.aurantiacus中克隆了一个几丁质酶同源基因。该基因全长1,253bp，包含一个由1,197个碱基构成的开放阅读框，编码398个氨基酸。序列比对分析表明，该基因编码蛋白属于糖苷水解酶18家族的几丁质酶。利用基因重组的方法构建酵母分泌型表达载体，并转化毕赤酵母。在甲醇的诱导下，重组蛋白得到了高效表达，第6天的表达量最高，达到0.433g/L，酶活力为28.96U/mg，同时对表达的几丁质酶进行了纯化，SDS-PAGE检测该蛋白的分子量为43.9kDa。该几丁质酶的最适反应温度为60℃，最适反应pH值为8.0，70℃处理30min仍有45%的相对酶活，具有较好的热稳定性及工业应用价值。