影响根癌农杆菌介导的丰香草莓遗传转化因素分析

将构建的携带NPTⅡ和AP-D基因的植物表达载体pBI121导入根癌农杆菌EH105中后,用其对草莓主栽品种丰香叶盘进行遗传转化,探讨了卡那霉素(Kan)的浓度、菌液浓度、侵染时间、预培养时间、共培养时间和筛选方式等因素对转化率的影响。结果表明丰香草莓适宜的转化条件是Kan筛选浓度为20mg/L,预培养时间为2~3d,菌液浓度OD6000.3~0.5,侵染时间10~20min;共培养2~3d后将外植体接到含有5mg/LKan和500mg/LCarb的诱导培养基上进行培养,以后每次继代逐步提高Kan选择压力至终浓度20mg/L(每次增加5mg/L);或共培养2~3d后将外植体接到含有500mg/LCarb的诱导培养基上,培养2周后继代到含20mg/LKan和400mg/LCarb的培养基上进行选择培养。根据PCR检测结果,抗性愈伤组织转化率高达18.5%。抗性愈伤组织经进一步诱导,最后获得了17株抗性植株。本文探讨了影响丰香草莓转化的多个因素,以期建立高效的遗传转化体系,为草莓属植物种质的遗传转化奠定基础。