农杆菌介导普那菊苣遗传转化体系的建立

以普那菊苣(CichoriumintybusL.cv.Puna)叶片为试验材料,接种于含不同激素浓度配比的MS培养基上进行愈伤组织、芽分化以及根再生的诱导,分析了不同激素浓度及其配比对愈伤组织诱导和芽分化以及根再生效果的影响。以已经建立的再生体系为基础,以农杆菌菌株LBA4404(含质粒pBin438-TaNHX2)侵染转化普那菊苣,探索普那菊苣高效遗传转化体系。结果表明对外植体适宜的预培养时间为2～3d,与农杆菌的共培养时间也应控制在2～3d;侵染时间控制在8min左右;卡那霉素(Km)阳性筛选的适宜选择浓度为60mg·L-1。乙酰丁香酮(AS)200μmol·L-1是促进农杆菌转化的最佳浓度,200W超声波处理、20次负压处理也可提高农杆菌转化率效果。26mg·L-1Km是野生型普那菊苣苗能够存活的上限,头孢唑林钠和头孢噻肟钠在500～1000mg·L-1浓度范围内、羧苄青霉素300mg·L-1和氨苄青霉素在40～60mg·L-1浓度范围内均能较好的诱导出愈伤组织和芽。将来自小麦(Triticumaestivum)的Na+/H+逆向转运蛋白(vacuolarNa+/H+exchangerorantiporter,简称NHX,NHE或NHA)导入普那菊苣;经抗生素筛选以及针对TaNHX2基因的PCR检测和Southern杂交分析,证明获得了28株转TaNHX2基因的普那菊苣植株。