苜蓿原生质体电融合适宜条件的筛选

为改良培育苜蓿(Medicago)新品种,拟建立苜蓿原生质体融合体系。通过电融合方法,使俄罗斯杂花苜蓿(M.varia)原生质体和甘农4号紫花苜蓿(M.sativa‘GannongNo.4')原生质体进行非对称融合,获得了杂交细胞,研究不同失活处理条件、电场条件、原生质体密度对苜蓿原生质体融合的影响。结果表明经过紫外灯辐射5min的俄罗斯杂花苜蓿原生质体和6mmol·L-1IOA处理的甘农4号紫花苜蓿原生质体,密度调至3×105~5×105个·mL-1,以交流电场强度15~20V·cm-1、交流频率2000~2500kHz,直流脉冲场强200~250V·cm-1、脉冲宽幅40μs、脉冲个数为3的条件为最适电融合条件,此时一对一有效融合率最高可达13.8%。