TLR4基因的沉默下调了NOD1信号通路在RAW264.7细胞中抗烟曲霉孢子刺激作用

为研究单核巨噬细胞RAW264.7受烟曲霉孢子刺激时NOD1和TLR4信号通路在细胞处于正常状态和免疫抑制状态时发挥的作用,以及沉默TLR4基因后对NOD1信号通路的影响,通过建立细胞免疫抑制模型,利用RNAi技术将TLR4-siRNA转染细胞24h后给予烟曲霉孢子刺激12h,运用RT-PCR和Westernblot法检测细胞受烟曲霉孢子刺激后NOD1,TLR4,RIP2,MyD88mRNA及TNF-α蛋白表达变化.研究发现:(1)给予RAW264.7细胞含免疫抑制剂甲泼尼龙琥珀酸钠浓度为0.04mg/mL的RPMI1640培养液培养12h后,细胞抑制效果最佳,存活率约为90%.(2)正常RAW264.7细胞受烟曲霉孢子刺激时,NOD1和TLR4信号通路被激活,通过释放促炎细胞因子TNF-α发挥抗烟曲霉孢子刺激作用,当细胞处于免疫抑制状态时,NOD1和TLR4信号通路不能激发其有效的免疫应答.(3)TLR4-siRNA转染RAW264.7细胞,沉默效率达83%.(4)TLR4基因的沉默,使NOD1信号通路不能被很好地激活来抵抗烟曲霉孢子对细胞的刺激作用,表明沉默TLR4基因下调了NOD1信号通路在RAW264.7细胞中的抗烟曲霉孢子刺激作用.