水稻Bowman-Birk蛋白酶抑制剂基因OsWIP1-2的诱导表达及其抑制活性

克隆了水稻的WIP1基因，该基因属于Bowman—Birk蛋白酶抑制剂(BBI)家族．RNA杂交实验结果显示该基因的表达受伤害和茉莉酮酸的诱导，表明它在植物防御反应中起着重要的作用．将此基因克隆到表达载体pET28a，并在大肠杆菌中表达融合蛋白．分别用胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶为底物检测纯化的融合蛋白的抑制活性，发现融合蛋白具有胰凝乳蛋白酶的抑制活性，但没有对胰蛋白酶的抑制活性；同时发现融合蛋白C端的融合残基对蛋白酶抑制活性有重大影响，具有C端(His)6纯化标签的融合蛋白不具有胰凝乳蛋白酶的抑制活性，而有天然C端序列的融合蛋白具有胰凝乳蛋白酶的抑制活性，这暗示了过长的C末端序列可能会影响WIP1蛋白的正确折叠．蛋白酶抑制活性分析表明水稻Bowman—Birk抑制剂家族的成员可能在结构和功能上均发生了分化．