Purification and characterization of a laccase from the mutated strain SAH-12 of Trametes gallica
粗毛栓菌诱变菌株SAH-12漆酶的分离纯化及酶学性质研究

粗毛栓菌Trametes gallica诱变菌株SAH-12是通过紫外诱变选育所得的漆酶高产菌株，Active-PAGE分析表明SAH-12在高氮低碳无机盐培养液（LM3）中至少分泌3种漆酶同工酶（Lac1、Lac2、Lac3）。采用硫酸铵盐析、透析和Sephadex-G75分子筛层析从其培养液中分离纯化得到电泳纯的Lac1，纯化倍数6.54，酶活性回收59.7%。Lac1经SDS-PAGE验证为一条带，其表观分子量为61.5kDa。Lac1为一种糖蛋白，含糖量11.6%，等电点pI 4.40，催化氧化底物ABTS的最适反应温度为60℃，最适pH为2.6，Km值为25μmol/L。Lac1在40℃（pH4.0）以下和pH1.5～5.0（28℃）范围内稳定。金属离子Fe2+、Ag+、Hg2+和Cr3+与抑制剂DTT、SDS、EDTA和DMSO对Lac1有抑制作用，其中Fe2+和DTT完全抑制酶活，而Cu2+对酶有明显激活作用，Mn2+、Zn2+对酶活影响不大。Lac1不仅可使一些合成染料明显脱色，而且对苹果汁多酚祛除也有较好效果。40℃用该酶（1U/mL）处理苹果汁5h，其多酚含量可降低40%。