Expressing the tdh gene of Vibrio parahaemolyticus in Pichia pastoris and its hemolysis activity
副溶血弧菌tdh基因在毕赤酵母中的表达及溶血活性检测

通过PCR 技术从副溶血弧菌(Vibrio Parahaemolyticus, VP)基因组DNA 上扩增耐热溶血素基因tdh, 双酶切后定向插入到酵母表达载体pPICZaA 中, 构建重组表达质粒pPICZaA-tdh, 经限制性内切酶SacI 线性化后电转化毕赤酵母(Pichia pastoris, P. pastoris)GS115, 经PCR 和测序鉴定耐热溶血素基因成功整合到毕赤酵母的基因组中。在甲醇诱导下进行 tdh 的表达, SDS-PAGE 分析证明重组 TDH(thermostable direct hemolysin, TDH) 的分子质量约为23 ku, 经 Western blotting 鉴定VP 抗体能与表达的 TDH 发生特异反应, 说明 tdh 基因在毕赤酵母中的表达是准确的。溶血实验证明了表达的TDH 具有溶血活性。本研究首次应用毕赤酵母表达耐热溶血素基因 tdh, 在培养基中获得分泌表达的耐热溶血素, 为研究tdh 基因的功能奠定了基础。