The Construction of Recombinant Strain Pseudomonas sp.B4 and the Optimization of Fermentation Conditions
基因工程菌Pseudomonas sp.B4的构建及其产邻苯二酚发酵条件的初步研究

利用PCR技术以Pseudomonas sp．B3—1基因组DNA为模板，扩增出2．9kb编码苯甲酸双加氧酶基因簇benABC。将该基因簇连接于pLAFRJ载体，电转化至E．coli DH5α，再通过三亲本结合法导入野生菌株Pseudomonas sp．B3—1中，得到了一株邻苯二酚产量提高的基因工程菌，命名为Pseudomonas sp．B4，在相同发酵条件下，工程菌Pseudomonas sp．B4的邻苯二酚产量达到0．5mg／ml，比野生菌株Pseudomonas sp．B3-1提高了17．5％。对工程菌Pseudomonas sp．B4进行发酵条件优化表明，当苯甲酸钠浓度为6．0g／L，聚蛋白胨浓度为2．5g／L，温度为32℃以及pH值为6．0时，工程菌在200r／min旋转摇床发酵36小时后，邻苯二酚产量达到0．7mg／ml，比野生菌株Pseudomottos sp．B3-1提高了75％。