用长PCR方法检测含有较大缺失或插入的DNA大片段 Long PCR Amplification of Fragment with Large Deletion orInsertion Allelic

选择位于１９ｑ１３３上的人类肌张力蛋白激酶基因（ｍｙｏｔｏｎｉｎｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅｇｅｎｅ，ＭＴ－ＰＫ）为靶基因（基因全长为１４ｋｂ），以Ｇ＋Ｃ含量较高且含有１ｋｂ缺失或插入，由基因第８内含子中的Ａｌｕ±１ｋｂ的５＇端至第１５外显子３＇非编码区中的ＣＴＧ重复序列３＇端，即两者间的距离为５３ｋｂ的ＤＮＡ片段为待扩增靶序列，通过优化ＤＮＡ聚合酶的组合和反应缓冲体系，重点考查了含有Ａｌｕ－１ｋｂ和Ａｌｕ＋１ｋｂ缺失或插入的ＭＴ－ＰＫ等位基因片段共扩增的长ＰＣＲ方法。本方法可有效地同步扩增６５ｋｂ和５５ｋｂ两个等位基因片段，对６５ｋｂ和５５ｋｂ纯合等位片段则达到了更有效的扩增。