Study on Pluripotency and Cultivation of ES-like Cells Derived from Male Germ Stem Cells of Bovine Fetuses
胎牛雄性生殖干细胞源类ES细胞的分离培养与多能性研究

雄性生殖干细胞（male germ stem cells, mGSCs）来源于原始生殖细胞(primordial germ cells, PGCs)，且终生存在于性分化后的睾丸中。从20周胎牛分离睾丸细胞，2步连续贴壁速率差法能有效纯化胎牛mGSCs，经流式细胞仪检测，CD9阳性细胞的比例达到 95.8%。原代与支持细胞共培养，出现隆突状和鸟巢状两种细胞集落。获得1株传至4代仍呈现集落生长的细胞株，且集落AKP染色阳性。对第3代鸟巢状细胞集落免疫组化和诱导分化分析，结果显示：SSEA1和Oct-4免疫组化染色阳性；短期内可自发形成c-kit染色阳性的分化态精原细胞；定向诱导分化形成了表达神经丝蛋白(Neuro filament，NF)的神经样细胞和表达α-actin的心肌样细胞团。试验结果表明：20周胎牛雄性生殖干细胞在体外可形成具有多分化潜能性的类胚胎干（embryonic stem, ES）细胞。