Construction of Astragalus sinicus AD-cDNA library and identification of proteins interact with the leghemoglobin
紫云英AD-cDNA文库构建及与豆血红蛋白Lb相互作用靶蛋白的筛选

摘要：【目的】本文旨在构建紫云英酵母双杂交AD-cDNA文库和互作靶蛋白筛选平台，为深入研究共生固氮作用的分子机理奠定工作基础。【方法】以接种华癸中慢生根瘤菌7653R的豆科植物紫云英不同时期根部组织为材料，抽提和纯化RNA，构建了一个酵母AD-cDNA文库。库容量达到1.02×106/3 μg pGADT7-Rec DNA，插入片段大小1-1.5 kb左右。以紫云英豆血红蛋白基因AsB2510构建诱饵载体pGBKT7-AsB2510，利用酵母双杂交技术，筛选与诱饵蛋白相互作用的靶蛋白。【结果】在含有X-gal的SD四缺培养基上筛选得到26个克隆，经过质粒抽提、PCR鉴定、回转酵母验证获得10个阳性克隆。【结论】对阳性克隆的外源片段进行了测序和同源性分析，发现一个值得深入研究的含有tify domain和Divergent CCT motif的转录调控因子。