Cloning and expression of ORF146 gene of Spodoptera litura multicapsid nucleopolyhedrovirus II (SpltMNPVII)
斜纹夜蛾核型多角体病毒ⅡORF146基因的克隆、表达与启动子活性分析

摘要: 【目的】研究斜纹夜蛾核型多角体病毒II ORF146基因的结构与功能。【方法】根据SpltMNPV II ORF146基因序列设计引物，经PCR扩增克隆ORF146基因。在生物信息学分析基础上进行启动子活性分析和转录时相分析。构建ORF146片段的原核表达载体，表达并纯化融合蛋白后制备多克隆抗体。【结果】核苷酸序列分析表明，读码框含1383 bp，编码460个氨基酸的蛋白质，推定分子量为50.4 kD。启动子活性分析和转录时相分析都表明该基因是个早、晚期都表达的基因，在病毒感染8h和18h有两个转录峰，24h以后转录水平略有下降，但趋于稳定。pET-28a-ORF13原核表达的融合蛋白经纯化后制备的多克隆抗体特异性高，效价可达1:3200以上。【结论】SpltMNPV II ORF146基因是一个早期和晚期都表达的病毒组成型结构蛋白基因。推测ORF146基因可能与SpltMNPV II病毒感染宿主细胞后病毒DNA复制有关。制备的多克隆抗体可用于深入研究该蛋白的生物学特性与功能。