大肠杆菌青霉素酰化酶的提纯及其性质的研究

大肠杆菌(Escherichia coli) AS 1.70发酵液经有机溶剂处理，硫酸铵分级，再用聚丙烯酰胺垂直板凝胶电泳进行纯化，得到了聚丙烯酰胺凝肢电泳均一的青霉素酰化酶纯品。纯酶作用的最适温度为45—55℃，最适pH为7．0—7．7，在无NIPAB存在下，纯酶在45℃以下稳定，但在55℃保温一小时，酶活力残存33．58％，纯酶在pH5．0—8.0稳定。酶作用于重排酸的米氏常数为3．33×10-2g／ml。Ag+对酶有抑制作用。用聚丙烯酰胺薄层凝胶等电聚焦测定酶的等电点(pI)为6．7—6．8，用SDS凝胶电泳测酶的亚基分子量分别为14300和58900。纯酶具有水解苯甘氨酸甲酯盐酸盐的作用，反应两小时产生12．74mM苯甘氨酸。