Expression,Purification and Characterization of Arabinofuranosidase from Thermotoga maritima
极耐热性阿拉伯糖苷酶基因的表达、纯化及酶学性质研究

采用PCR从海栖热袍菌(Thermotoga maritima)克隆出编码极耐热稳定性阿拉伯糖苷酶基因，以pET20b为表达质粒，与其C末端6个组氨酸标签序列融合，在大肠杆菌中得到高效表达。基因表达产物通过热处理和亲和层析柱纯化后，酶纯度达电泳均一。纯化重组酶稳定性检测表明，阿拉伯糖苷酶活性最适作用温度和最适作用pH分别为90～95℃和pH 5.0～5.5,在pH 4.2～8.2之间酶活力稳定，95℃的半衰期为4h;SDSPAGE测得酶的分子量为56.57 kD，与理论推算值相吻合。在所测定的底物中，阿拉伯糖苷酶仅对对硝基苯阿拉伯呋喃糖苷（pNPAF）有专一性水解作用，其动力学参数Km值为018mmol/L, Vmax为139μmol/min·mg。