链霉菌高拷贝质粒pIJ101的研究 V．两个拷贝数突变子及其与克隆片段的关系

在分离和定位链霉菌高拷贝质粒PlJ101上启动子活性区域的过程中，我们将Bc11-E片段经MboI进一步酶解后，克隆到由pIJ101基本复制功能区所衍生的载体pIJ425的BgIII位点上，从转化酶、铅青链霉菌TK64以原生质体所获得的硫链丝菌素抗性转化子中，发现了两个拷贝数极其异常的衍生质粒，命名为PI J2743和PIJ2744。与plJ425相比，pIJ2743的拷贝数增加约10倍，而pIJ2744的拷贝数则降低约10倍。拷贝数的剧增和剧减不是由于质粒宿主的突变，因为它们在重新转化的宿主中仍显示了突变型拷贝数特征。拷贝数的变化也不是由于载体的突变，因为切除插入片段后，载体区域再连接后的质粒仍与原始plJ425的拷贝数相同。将高拷贝突变子中0.63kb的插入片段以两种不同的取向克隆到另一个类似于pIJ425的载体p1J 486的BamHI位点，在一种取向插入时，新衍生的质拉仍显示出投高的拷贝数，而在另一种取向时，质粒的拷贝数不发生变化，说明拷贝数的剧增不仅只与插入片段有关，而且其功用具有明显的方向性，即为-顺式作用因子。