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生物物理学报 1994
THE KINETIC STUDY OF DIPICOLINIC ACID TRANSPORT ACROSS RED BLOOD CELL MEMBRANE BY BAND 3 PROTEIN
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Abstract:
利用DPA使Tb3+的荧先强度显著增强的原理进行带3蛋白活性的测定,方法简便、灵敏、重复性好,而且能够进行连续荧光扫描测量.应用连续荧光扫描法测定了带3蛋白介导的DPA与Cl-交换的动力学特征参数.结果表明,带3蛋白介导的DPA与Cl-的交换对DIDS非常敏感,受DIDS的强烈抑制,抑制程度大于90%;DPA由内向外转运的米氏常Km=28.1—31.2mmol/L;带3蛋白的天然底物Cl-从内侧竞争性抑制DPA向外转运,抑制常数ki=60.4±6.9mmol/L;膜内侧DPA与外侧Cl-交换的活化能,在4—25℃范围内为5.8±0.5kCal/mol25—37℃范围内为19.8±1.5kCal/mol;膜内侧DPA与外侧Cl-交换受转运介质pH(膜内外对称改变)的显著影响,pH<7.4时,交换速度显著升高.本实验证明DPA确是经带3蛋白而转运的,但转运机制可能与无机离子转运有所不同。