Construction of brain cDNA libraries and molecular cloning and expression analysis of GNRH gene in marbled eel (Anguilla marmorata)
花鳗鲡脑cDNA文库的构建及GnRH基因克隆与表达分析

以花鳗鲡脑组织为材料，提取总RNA，应用CloneminerTM文库构建试剂盒构建cDNA文库。经检测，文库的滴度为4.3×106 cfu/mL，总容量为5.16×107 cfu/mL，阳性克隆率为99.6%，插入片段0.43－3.2kb之间，平均插入片段大小为1532bp。以文库为模板，克隆获得花鳗鲡两种类型的促性腺激素释放激素（mGnRH和cGnRH-II）cDNA序列。序列分析表明，花鳗鲡mGnRH cDNA开放阅读框(ORF)包含276个碱基，编码91个氨基酸，其中包括22个氨基酸的蛋白质前体信号肽（1－22位氨基酸）、mGnRH十肽（23－32位氨基酸）、一个三肽裂解位点（33－35位氨基酸）和56个氨基酸的GnRH相关肽（36－91位氨基酸）；花鳗鲡cGnRH-II cDNA开放阅读框包含264个碱基，编码87个氨基酸，其中包括24个氨基酸的蛋白质前体信号肽（1－24位氨基酸）、cGnRH-II十肽（25－34位氨基酸）、一个三肽裂解位点（34－36位氨基酸）和50个氨基酸的GnRH相关肽（37－87位氨基酸）。序列同源性分析表明，花鳗鲡mGnRH、cGnRH-II cDNA与日本鳗鲡之间的相似性率高达98%；与鲑形目、鲈形目、鲽形目鱼类的相似率为73%－78%；而与鲤形目鱼类的相似性相对较低（63%－67%）。采用RT-PCR 方法分析了两种GnRH基因在花鳗鲡雌雄个体中的表达，结果表明该两基因在雌雄个体的组织表达模式无明显差异；但mGnRH基因在雌雄个体内表达部位多于cGnRH-II的。