%0 Journal Article
%T 拟除虫菊酯类农药单链可变区抗体的制备、 鉴定及其特异性分析
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%D 2017
%X 目的 制备拟除虫菊酯类农药可溶性单链可变区(single-chain fragment variable, scFv)抗体, 鉴定其免疫活性并对其特异性进行分析。方法 构建表达载体pET28a(+)-scFv和pET42a(+)-scFv并转化BL21(DE3), 重组菌经诱导后通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定目的蛋白的表达。可溶性融合蛋白scFv/GST经Glutathione Sepharose 4B纯化后用Factor Xa切除GST标签获得scFv, 然后采用Western blotting 法对其进行鉴定。scFv对7种拟除虫菊酯类农药的特异性采用间接竞争酶联免疫法进行分析。结果 经0.1 mmol/L IPTG诱导后, 重组菌BL21(DE3)-pET28a(+)-scFv和BL21(DE3)-pET42a(+)-scFv表达的目标蛋白分别为包涵体抗体和部分可溶性抗体。经鉴定, 可溶性scFv相对分子量约为30 kDa, 效价为1:25600。同源半抗原Hap1对单链抗体scFv的IC50为2.43 μg/mL, 检出限为0.045 μg/mL; scFv抗体对氯菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯均有较高特异性, IC50分别为3.29、4.72和5.55 μg/mL。结论 本研究成功获得了拟除虫菊酯类农药的可溶性单链可变区抗体, 该抗体对3种拟除虫菊酯农药具有很强的特异性, 该研究可为拟除虫菊酯类农药多残留免疫分析提供依据
%K 拟除虫菊酯类农药 单链可变区抗体 多残留免疫分析
%U http://www.chinafoodj.com/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20161115002&flag=1