%0 Journal Article %T 低H+-ATPase活性植物乳杆菌突变菌筛选及基因表达的相对定量分析 %A 尤玉如 %A 张祥 %A 方卉 %A 林越呈 %A 泮国荣 %A 王宏鹏 %A 葛青 %A 谢东芳 %A 陶颖妍 %A 黄俊 %A 龚金炎 %J - %D 2017 %R 10.13343/j.cnki.wsxb.20160304 %X [目的]筛选H+-ATPase活性降低的植物乳杆菌突变菌,比较其与亲本菌基因表达水平的差异,进一步探索H+-ATPase的调控机制。[方法]利用硫酸新霉素诱变、筛选突变菌,并对亲本菌(ZUST)和突变菌(ZUST-1、ZUST-2)进行生长、产酸能力及H+-ATPase活性的测定。分别提取亲本菌和突变菌的基因组DNA,扩增H+-ATPase全部编码基因并测序。通过荧光定量PCR对H+-ATPase全部编码基因进行相对定量分析。[结果]突变菌的生长和产酸能力均低于亲本菌,突变菌ZUST-1和ZUST-2的H+-ATPase活性比亲本菌分别降低了10.1%和28.8%。突变菌ZUST-1和ZUST-2的atpA基因均有22个位点发生突变,而ZUST-2的atpC基因有6个位点发生突变。突变菌ZUST-1和ZUST-2的atpA在对数期基因表达水平分别比亲本菌ZUST下调了41.1%和35.7%,在稳定期分别下调了43.6%和14.2%;ZUST-1的atpC基因在对数期的表达水平比ZUST略高,在稳定期比ZUST上调了30%,而ZUST-2的atpC基因未表达。[结论]突变菌H+-ATPase活性减弱会导致其全部编码基因在稳定期表达水平上调(除ZUST-2的atpC不表达外),而且atpA和atpC基因突变导致的基因表达水平的差异是影响H+-ATPase活性的主要因素,此研究结果为进一步研究植物乳杆菌中H+-ATPase的调控机制奠定了基础 %K 植物乳杆菌 H+-ATPase 突变 荧光定量PCR %U http://journals.im.ac.cn/ACTAMICROCN/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20170214&flag=1