%0 Journal Article
%T 新型隐球酵母U6启动子的鉴定、克隆及功能验证
%A 朱旭东
%A 朱项阳
%A 王宇
%A 肖婷婷
%A 赵雪茹
%A 魏东盛
%J -
%D 2017
%R 10.13343/j.cnki.wsxb.20160206
%X [目的]鉴定及克隆新型隐球酵母（Cryptococcus neoformans）中Pol Ⅲ型的U6启动子（CnU6启动子），并验证CnU6启动子能否有效转录shRNA及CRISPR/Cas9系统中gRNA。[方法]结合GenBank数据库已公布的新型隐球酵母基因组信息和本实验室RNA-seq文库数据，利用生物信息学技术分析得到新型隐球酵母中具有高转录水平的U6 RNA序列。使用重叠PCR和EasyGeno方法将预测的CnU6启动子分别克隆到shRNA及gRNA的上游区域，通过观察shRNA对靶基因的RNAi效果及gRNA引导Cas9核酸酶对靶位点的切割结果，确定CnU6启动子能否转录短RNA。[结果]CnU6启动子能够转录形成shRNA对靶基因进行沉默，并且能转录形成gRNA引导Cas9核酸酶对靶点进行切割。[结论]新型隐球酵母的CnU6启动子被成功鉴定及克隆，它能有效驱动shRNA和gRNA的转录
%K 新型隐球酵母 CnU6启动子 shRNA CRISPR/Cas9
%U http://journals.im.ac.cn/ACTAMICROCN/ch/reader/view_abstract.aspx?file_no=20170205&flag=1