%0 Journal Article
%T 提高天冬氨酸β-脱羧酶在酸性环境中催化活力的分子改造
%J 应用与环境生物学报
%D 2018
%R 10.19675/j.cnki.1006-687x.2018.01022
%X 克隆了德阿昆哈假单胞菌（Pseudomonas dacunhae）来源的L-天冬氨酸β-脱羧酶基因（Asd），实现其在Escherichia coli 中的异源表达，但该酶在酸性环境中活性较低，不利于工业生产. 为通过定点突变技术提高该酶在酸性环境中的活力，选择底物通道区域内的5个氨基酸残基作为突变位点，构建6个突变体，随后分析突变体的酶学特性. 结果表明，相比于野生型Asd，大多数突变体的比酶活显著下降，只有突变体N34D比酶活（71.67 U/mg）比野生型（65.95 U/mg）略高；另外，突变体N34D在3.5 < pH < 5.5酸性环境中的酶活力与野生型Asd相比均得到了提高，其中pH 5.0条件下突变体N34D相对酶活达到82%，而野生型Asd相对酶活只有50%左右；而在pH 5.5-8.5范围内突变体N34D的酶活力与野生型相当. 最后将突变体N34D应用于催化合成L-丙氨酸，在最适催化条件（pH 5.5）下，突变体N34D催化合成L-丙氨酸的产量是野生型Asd的1.5倍. 本研究通过对德阿昆哈假单胞菌来源的N34位点进行突变，成功提高了天冬氨酸β-脱羧酶在酸性环境中的酶活力，并提高了其合成L-丙氨酸的能力，这对酶法生产L-丙氨酸具有重要的指导意义. （图4 表4 参24
%K 德阿昆哈假单胞菌
%K L-天冬氨酸β-脱羧酶
%K 酶学性质
%K 底物通道
%K 定点突变
%U http://www.cibj.com/oa/DArticle.aspx?type=view&id=2018.01022