%0 Journal Article
%T 利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7细胞株
%J 南方医科大学学报
%D 2017
%X 目的利用CRISPR/Cas9系统构建稳定敲除4.1R基因的RAW264.7巨噬细胞株，为研究4.1R在巨噬细胞中的功能奠定基 础。方法根据CRISPR/Cas9 靶向原理设计并合成3 个特异性识别4.1R 基因的向导RNA（sgRNA），构建sgRNAlentiCRISPRv2 重组质粒并转入293T细胞中制备sgRNA-Cas9慢病毒，慢病毒侵染RAW264.7细胞，嘌呤霉素筛选出阳性细胞 并稀释至单克隆，Western blotting印记检测单克隆细胞中蛋白4.1R的表达，测序确认单克隆细胞中突变位点。结果Western blotting印迹检测结果表明筛选出的1株单克隆细胞中蛋白4.1R的表达完全缺失；测序结果表明该细胞株中4.1R基因发生了 19bp的缺失突变；并且4.1R基因敲除后，RAW264.7细胞的增殖能力显著增加。结论本研究利用CRISPR/Cas9系统成功的干 扰了巨噬细胞系RAW264.7细胞中4.1R的表达，为研究4.1R在巨噬细胞中的功能提供了有效工具
%K CRISPR/Cas9系统
%K 4.1R
%K 基因敲除
%K RAW264.7细胞
%U http://www.j-smu.com/oa/darticle.aspx?type=view&id=2017121609