%0 Journal Article
%T 多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子对体外培养的视网膜色素上皮细胞磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶信号通路的调控作用
%A 东莉洁
%A 乐毅
%A 张晓敏
%A 李筱荣
%A 苏畅
%A 茹玉莎
%A 郭如如
%J -
%D 2015
%R doi:10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2015.04.013
%X 目的观察多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)对体外培养的视网膜色素上皮(RPE)细胞磷脂酰肌醇3 激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路的调控作用。 方法将体外培养的RPE细胞分为PSF高表达组、PSF高表达对照组、PSF低表达组、PSF低表达对照组及假转染组。应用脂质体2000将上调PSF表达的真核质粒增强型绿色荧光蛋白(pEGFP)-C2-PSF、下调PSF表达的真核质粒pGenesil-PSF-RNAi以0.25、0.50、1.00 μg的递增量分别转染至PSF高表达组及PSF低表达组细胞。PSF高表达对照组细胞转染pEGFP-C2空载质粒。PSF低表达对照组细胞转染pGenesil-scramble-siRNA质粒。假转染组仅做转染处理,不加入任何表达质粒。采用水溶性四氮唑法检测胰岛素样生长因子1(IGF-1)刺激条件下PSF对RPE细胞增生的影响。应用脂质体2000将0.50 μg真核质粒pEGFP-C2-PSF、1.00 μg真核质粒pGenesil-PSF-RNAi及pEGFP-C2空载质粒转染细胞分别作为PSF高表达组、PSF低表达组、对照组,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测PSF对 IGF-1诱导的RPE细胞内血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达的影响。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PSF对IGF-1诱导的磷酸化Akt(pAkt)蛋白表达的影响。在IGF-1刺激后,将RPE细胞分为单纯渥曼青霉素(Wortmannin)处理组、单纯PSF高表达组、渥曼青霉素联合PSF高表达处理组,并以未经渥曼青霉素处理的常规体外培养的RPE细胞为对照组,采用实时定量PCR检测各组VEGF的表达。 结果IGF-1刺激后,PSF高表达组、PSF高表达对照组及假转染组之间RPE细胞增生率比较,差异有统计学意义(F=29.728,P<0.05);PSF低表达组、PSF低表达对照组及假转染组之间RPE细胞增生率比较,差异有统计学意义(F=14.121,P<0.05)。PSF高表达组RPE细胞中VEGF mRNA表达较对照组明显降低,差异有统计学意义(P=0.000 3);PSF低表达组RPE细胞中VEGF mRNA表达较对照组明显提高,差异有统计学意义(P=0.030 9)。Western blot检测结果显示,IGF-1刺激可上调pAkt蛋白表达水平,PSF高表达可明显下调pAkt蛋白表达水平。IGF-1刺激后,渥曼青霉素联合PSF高表达处理组VEGF表达较单纯渥曼青霉素处理组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论PSF能抑制IGF-1 刺激后体外培养的RPE细胞中PI3K/Akt信号通路活化,下调VEGF表达
%K 多聚嘧啶区结合蛋白质
%K 视网膜色素上皮/酶学
%K 磷酸肌醇3-激酶类
%K p21活化激酶类
%K 信号传导
%U http://www.coretina.com:80/article/10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2015.04.013