%0 Journal Article
%T 抑制Claudin-3表达对体外培养鼠视网膜神经节细胞的作用研究
%A 刘入源
%A 刘秋慧
%A 卢晶
%A 吕林
%A 张晓梅
%A 王肖
%A 罗燕
%J -
%D 2017
%R doi:10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2017.02.013
%X 目的 观察腺相关病毒（AAV）介导小发夹RNA（shRNA）干扰抑制Claudin-3表达对体外培养小鼠视网膜神经节细胞（RGC）的影响。 方法 原代培养小鼠RGC分为正常对照组、AAV-shScramble组、AAV-shClaudin3组。细胞接种24 h后，AAV-shScramble组、AAV-shClaudin3组RGC分别转染AAV-shScramble和AAV-shClaudin3。转染96 h后，活细胞荧光动态显微镜观察目的病毒转染效率；β-微管蛋白免疫荧光染色检测RGC轴突长度；免疫荧光4′，6-二脒基-2-苯基吲哚染色观察RGC凋亡形态；实时聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组RGC Claudin-3、血管内皮生长因子（VEGF）mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组RGC Claudin-3、VEGF、B淋巴细胞瘤/白血病-2基因（Bcl-2）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达水平。 结果 活细胞动态荧光显微镜观察发现,AAV-shScramble组、AAV-shClaudin3组RGC病毒转染效率均＞50%；病毒转染96 h后，AAV-shClaudin3组RGC轴突长度明显低于正常对照组、AAV-shScramble组，差异有统计学意义（ F=2 363.274， P＜0.05）；AAV-shClaudin3组RGC密度较正常对照组、AAV-shScramble组明显减低，可见细胞核皱缩、趋边以及细胞核裂解形成的凋亡小体。AAV-shClaudin组RGC的Claudin-3、VEGF mRNA表达明显低于正常对照组和AAV-shScramble组，差异有统计学意义（ F=257.408、160.533， P＜0.05）。AAV-shClaudin3组RGC的Claudin-3、VEGF、Bcl-2蛋白表达明显低于正常对照组和AAV-shScramble组,差异有统计学意义（ F=129.671、420.552、62.669， P＜0.05）；Caspase-3蛋白表达明显高于正常对照组、AAV-shScramble组，差异有统计学意义（ F=231.348， P＜0.05）。 结论 AAV介导shRNA干扰抑制Claudin-3的表达可下调VEGF、Bcl-2及上调Caspase-3的表达，促进RGC凋亡，抑制RGC轴突生长
%K 视网膜神经节细胞/生理学
%K 紧密连接蛋白质类
%K RNA
%K 小分子干扰
%K 动物实验
%U http://www.coretina.com:80/article/10.3760/cma.j.issn.1005-1015.2017.02.013